熒光染料亮度怎么進(jìn)行比較?

　　熒光染料是細(xì)胞生物學(xué)等科學(xué)研究中不可或缺的重要工具，熒光濾色塊是熒光顯微鏡中至關(guān)重要的一個(gè)部件。我們大家在操作熒光染料亮度的時(shí)候，我們可以按照上面的比較方法去比較熒光染料的亮度，那么一般熒光染料亮度怎么進(jìn)行比較?

　　熒光染料的亮度可以用來(lái)比較不同熒光染料的熒光標(biāo)記效果，通過(guò)陰性細(xì)胞群與陽(yáng)性細(xì)胞群的熒光信號(hào)之間的關(guān)系來(lái)表示。但陰性細(xì)胞群的熒光信號(hào)受到信號(hào)強(qiáng)度、自發(fā)熒光、非特異性染色、儀器的電子噪聲等多個(gè)因素相關(guān)。

　　熒光染料染色指數(shù)是陽(yáng)性細(xì)胞群的平均熒光強(qiáng)度與陰性細(xì)胞群的平均熒光強(qiáng)度之差與陰性細(xì)胞群熒光強(qiáng)度標(biāo)準(zhǔn)差之間比值的一半。熒光染料染色系數(shù)只和抗體克隆與質(zhì)量、熒光團(tuán)純度與質(zhì)量、熒光修飾比、激光線及其功率、長(zhǎng)通和帶通濾光片、目的細(xì)胞等因素相關(guān)。

　　熒光染料的染色指數(shù)與熒光染料的亮度呈正相關(guān)，也就是熒光染料亮度越高，染色系數(shù)也就高。

DNA染料：

　　DAPI熒光染料，超純，AAT-17510

　　凋亡細(xì)胞核酸藍(lán)色染料，AAT-17548

　　圖1.用Cell Navigator?脂質(zhì)液滴熒光測(cè)定試劑盒(Cat#22735)和Nuclear Green?LCS1(Cat#17540)染色的油酸處理過(guò)的HeLa細(xì)胞的熒光圖像。

細(xì)胞增殖染料：

　　藍(lán)色活細(xì)胞熒光探針CytoTell Blue，AAT-22251

　　圖2.用CytoTell?Green和CFSE進(jìn)行的細(xì)胞增殖測(cè)定。在第0天，用CytoTell?Green或CFSE對(duì)Jurkat細(xì)胞(?2×106細(xì)胞/ mL)進(jìn)行染色。在指定的那天，以1：1的比例連續(xù)通過(guò)細(xì)胞。在通過(guò)當(dāng)天，在FITC通道中用ACEA NovoCyte 3000流式細(xì)胞儀測(cè)量熒光強(qiáng)度。連續(xù)幾代人以不同的顏色代表。

細(xì)胞活力檢測(cè)染料

　　鈣黃綠素?zé)晒馊玖?，超?jí)純，AAT-22006

　　圖3.用CytoCalcein Violet 500(Cat#22013)染色的活HeLa細(xì)胞圖像。細(xì)胞核用Hoechst 33342(Blue，Cat#17535)染色。

熒光標(biāo)記染料

　　iFluor 350琥珀酰SE，AAT-1020

　　圖4.將 HeLa細(xì)胞與(Tubulin +)或不與(Tubulin-)小鼠抗微管蛋白一起孵育，然后與iFluor?488山羊抗小鼠IgG綴合物(綠色，左)或AlexaFluor?488山羊抗小鼠IgG綴合物(綠色，右)。細(xì)胞核用Hoechst 33342(藍(lán)色)染色。